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线粒体膜电位检测试剂盒(TMRM法)是利用TMRM探针检测线粒体膜电位的试剂盒，可以快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化，可以用于早期的细胞凋亡检测。
线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。TMRM是一种可以通透细胞膜的选择性染色活细胞线粒体的荧光染料，广泛用作检测线粒体膜电位的荧光探针。与JC-1一样，TMRM是阳离子荧光染料，在正常细胞中能够依赖线粒体跨膜电位进入线粒体基质。在细胞凋亡发生时，线粒体膜完整性破坏，线粒体膜通透性转运孔开放，引起线粒体跨膜电位(ΔΨm)的崩溃，TMRM重新释放出线粒体。
通过荧光信号的强弱来检测线粒体膜电位的变化，可用于培养的细胞或从组织中提取出的线粒体的膜电位检测。
四甲基罗丹明甲基酯(TMRM)可以选择性的定位于线粒体中，在线粒体中的积累被证明是由它们的膜电位驱动的。此外，由于它们的疏水特性降低，这些探针对细胞表现出与罗丹明6G相比低10～20倍的电位非依赖性结合。四甲基罗丹明乙酯为动态和最佳原位定量测量荧光染料之一，比罗丹明123更好，因为其被活细胞快速和可逆地吸收。
TMRM比罗丹明123更快地穿过质膜，并且它们的强荧光允许使用低探针浓度，从而避免聚集。由于它们的荧光对环境相对不敏感，因此TMRM的空间分辨荧光呈现其跨膜分布的无偏分布，TMRM已成功用于高分辨率对于影响活细胞中线粒体膜电位的药物的高通量筛选测定。
TMRM可以快速通过细胞膜，仅需几分钟就可被具有活性的线粒体所俘获，并且对细胞没有毒性。其荧光的增强或减弱说明线粒体膜电位的变化，线粒体膜电位的高低变化决定了TMRM的分布浓度。电位高，TMRM在线粒体的浓度高，显示为强力红色或桔红色；反之，TMRM弥散在胞浆内，荧光减弱表明线粒体膜电位降低。
TMRM将线粒体染色，带有橙色荧光，它的光谱特征与TRITC相似，TMRM的最大激发波长为549nm，最大发射波长为574nm。
检测方法：
● 流式细胞仪● 荧光显微镜● 激光共聚焦
样本类型：
● 悬浮细胞● 贴壁细胞

组份	50T	100T
组份A：TMRM染色液	50μL	100μL
组份B：探针稀释液	10mL	20mL

稀释液2～8℃保存，TMRM-20℃避光保存，避免反复冻融。有效期1年。
注：
● TMRM染色液需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20℃保存。
● 染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
● 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。


●流式细胞仪或荧光显微镜或激光共聚焦●离心机●移液器●PBS或HBSS


● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
● 细胞处理需要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。
● 始终保持平衡染液中pH值的一致性，因为pH值的变化将影响膜电位。
● 根椐细胞种类、实验条件不同流式细胞仪设置不同。
● 线粒体膜电位降低，荧光强度减弱。
操作步骤：
染色工作液的配制：
根据样本数量，用37℃培养箱预热染料稀释液试剂B将TMRM荧光染料10倍稀释。
再用HBSS或相应的无血清培养基或其他缓冲液将探针TMRM进行5000倍稀释，配制成染色工作液。
注：
● 也可不使用本盒中的试剂B，直接用HBSS等缓冲液或相应的无血清培养基稀释TMRM染料至所需浓度。
● 开始实验前，使用HBSS缓冲液或无血清培养基稀释染料储存液到需要的工作浓度。工作浓度应根据不同细胞的预实验结果确定的最佳工作浓度，建议至少在超过10倍范围的浓度下进行测试。一般染色终浓度为试剂盒中染料母液的20000～250000倍稀释，50000倍适合大多数细胞样本。
● 建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，每次使用一管，试剂-20℃避光冻存，一年稳定。
● 工作液现配现用。
● 为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。
● 若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育，荧光信号会衰减。
悬浮细胞
1.收集样本细胞。
2.用PBS洗涤细胞两次。离心收集细胞。
注：
● 300×g～500×g,2～8℃，离心时间5分钟收集细胞。
3.用适量TMRM染色工作液将细胞重悬，细胞密度约5～10×105个/mL。37℃,5% CO2的培养箱中孵育30分钟。
4.用流式细胞仪或荧光酶标仪/分光光度计检测分析结果，或用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察结果。
贴壁细胞
对于贴壁细胞，可以先收集细胞，重悬后参考悬浮细胞的检测方法。
结果分析：
检测时可以把激发光设置为549nm，发射光设置为574nm。
线粒体膜电位降低，荧光强度减弱。
用流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位的情况。
也可以用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察；用荧光分光光度计或荧光酶标仪检测。
注：
● 对于荧光显微镜或其它荧光含量分析，请使用TRITC/RFP过滤器设置。
● 对于流式细胞仪，使用488nm激光进行激发，使用570±10nm发射滤光片用于检测。
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